脂質(zhì)體
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脂質(zhì)體（liposome）是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中，
疏水尾部伸向空氣，攪動后形成雙層脂分子的球形脂質(zhì)體，直徑25~1000nm不等。脂質(zhì)體可用于轉(zhuǎn)基因，或制備的藥物，利用脂質(zhì)體可以和細胞膜融合的特點，將藥物送入細胞內(nèi)部
生物學(xué)定義:當兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時，分子的疏水尾部傾向于聚集在一起，避開水相，而親水頭部暴露在水相，形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的的封閉囊泡，稱為脂質(zhì)體。
藥劑學(xué)定義 脂質(zhì)體 (liposome): 系指將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型泡囊體。
機會性真菌感染是中性粒細胞減少的癌癥患者一種常見的致殘和致死病因,對這些患者需實施經(jīng)驗性抗真菌治療。為確定伏立康唑與制霉菌素B和氟康唑相比,預(yù)防或治療中性粒細胞減少的癌癥患者真菌感染的利與弊,丹麥北歐Cochrane中心的J?尷rgensen等檢索了Medline和Cochrane(截至2005年5月)數(shù)據(jù)庫,并檢索了相關(guān)文獻和試驗數(shù)據(jù),從中提取相關(guān)隨機試驗數(shù)據(jù)進行分析,并于今年1月25日在線發(fā)表了分析結(jié)果。[Cochrane Database Syst Rev 2006, (1): CD004707]
目錄 |
分類
脂質(zhì)體的分類
脂質(zhì)體按照所包含類脂質(zhì)雙分子層的層數(shù)不同，分為單室脂質(zhì)體和多室脂質(zhì)體。
小單室脂質(zhì)體(SUV)：粒徑約0.02～0.08um；大單室脂質(zhì)體 (LUV）為單層大泡囊，粒徑在0.1～lum。
多層雙分子層的泡囊稱為多室脂質(zhì)體 (MIV)，粒徑在1～5um之間。
組成與結(jié)構(gòu)
脂質(zhì)體的組成與結(jié)構(gòu)
脂質(zhì)體的組成：類脂質(zhì)（磷脂）及附加劑。
1、磷脂類：包括天然磷脂和合成磷脂二類。磷脂的結(jié)構(gòu)特點為一個磷酸基和一個季銨鹽基組成的親水性基團，以及由兩個較長的烴基組成的親脂性基團。
天然磷脂以卵磷脂（磷脂酰膽堿，PC）為主，來源于蛋黃和大豆，顯中性。
合成磷脂主要有DPPC（二棕櫚酰磷脂酰膽堿）、DPPE（二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺）、DSPC（二硬脂酰磷脂酰膽堿）等，其均屬氫化磷脂類，具有性質(zhì)穩(wěn)定，抗氧化性強，成
品穩(wěn)定等特點，是目前國外首選的輔料。
2、膽固醇：膽固醇與磷脂是共同構(gòu)成細胞膜和脂質(zhì)體的基礎(chǔ)物質(zhì)。膽固醇具有調(diào)節(jié)膜流動性的作用，故可稱為脂質(zhì)體“流動性緩沖劑”。
脂質(zhì)體的制備
1、注入法:主要用于制備單室脂質(zhì)體，少數(shù)為多室脂質(zhì)體，其粒徑絕大多數(shù)在2m以下。
2、薄膜分散法：主要用于制備多室或大單室脂質(zhì)體，超聲后以單室脂質(zhì)體為主。
3、超聲波分散法：主要用于制備以單室為主單室脂質(zhì)體。
4、逆相蒸發(fā)法：將磷脂溶于有機溶劑，加入含藥物的緩沖液，超聲使成穩(wěn)定w/o乳劑，減壓除去有機溶劑在旋轉(zhuǎn)器壁上形成薄膜，加入緩沖液使凝膠脫落，制得水性混懸液，通過
凝膠色譜法或超速離心法，除去未包入的藥物，即得大單室脂質(zhì)體。
5、冷凍干燥法：適合于熱敏感的藥物。
6、重建脂質(zhì)體：單室或多室型。是目前國外應(yīng)用最為廣泛的制備方法之一。其具有工藝穩(wěn)定、適合于工業(yè)化生產(chǎn)、質(zhì)量易于控制、產(chǎn)品穩(wěn)定性好等特點?！ ?/p>
脂質(zhì)體的質(zhì)量控制與評價
1、形態(tài)、粒徑及其分布
采用掃描電鏡、激光散射法或激光掃描法測定。根據(jù)給藥途徑不同要求其粒徑不同。如注射給藥脂質(zhì)體的粒徑應(yīng)小于200nm，且分布均勻，呈正態(tài)性，跨距宜小。
2、包封率和載藥量
包封率：包封率＝（脂質(zhì)體中包封的藥物/脂質(zhì)體中藥物總量）×100％
一般采用葡聚糖凝膠、超速離心法、透析法等分離方法將溶液中游離藥物和脂質(zhì)體分離，分別測定，計算包封率。通常要求脂質(zhì)體的藥物包封率達80%以上。
載藥量：載藥量＝[脂質(zhì)體中藥物量/（脂質(zhì)體中藥物＋載體總量）]×100％
載藥量的大小直接影響到藥物的臨床應(yīng)用劑量，故載藥量愈大，愈易滿足臨床需要。載藥量與藥物的性質(zhì)有關(guān)，通常親脂性藥物或親水性藥物較易制成脂質(zhì)體。
3、脂質(zhì)體的穩(wěn)定性
1)、物理穩(wěn)定性:主要用滲漏率表示。
滲漏率＝（放置前介質(zhì)中藥物量－放置后介質(zhì)中的藥量）/制劑中藥量x100%
膽固醇以加固脂質(zhì)雙分子層膜，降低膜流動，可減小滲漏率。
2)、化學(xué)穩(wěn)定性：
(1)磷脂氧化指數(shù)：氧化指數(shù)＝A233nm=A215nm；一般規(guī)定磷脂氧化指數(shù)應(yīng)小于0.2。
(2)磷脂量的測定：基于每個磷脂分子中僅含1個磷原素，采用化學(xué)法將樣品中磷脂轉(zhuǎn)變?yōu)?a href="/index.php?title=%E6%97%A0%E6%9C%BA%E7%A3%B7&action=edit&redlink=1" class="new" title="無機磷（尚未撰寫）" rel="nofollow">無機磷后測定磷摩爾量（或重量），即可推出磷脂量。
4、防止氧化的措施：
防止氧化的一般措施有充入氮氣，添加抗氧劑-生育酚、金屬絡(luò)合劑等；也可直接采用氫化飽和磷脂。
5、脂質(zhì)體的滅菌：
滅菌的一般方法有過濾除菌、無菌操作、－射線照射（60鈷15～20kGy）、121℃熱壓滅菌等?！ ?/p>
脂質(zhì)體的特點
1、靶向性和淋巴定向性：肝、脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的被動靶向性。用于肝寄生蟲病、利什曼病等單核-巨噬細胞系統(tǒng)疾病的防治。如肝利什曼原蟲藥銻酸葡胺脂質(zhì)體，其肝中濃度比普通
制劑提高了200～700倍。
2、緩釋作用：緩慢釋放，延緩腎排泄和代謝，從而延長作用時間。
3、降低藥物毒性：如兩性霉素B脂質(zhì)體可降低心臟毒性。
4、提高穩(wěn)定性：如胰島素脂質(zhì)體、疫苗等可提高主藥的穩(wěn)定性?！ ?/p>
脂質(zhì)體作為藥物載體的臨床應(yīng)用
1、抗腫瘤藥物載體：阿霉素脂質(zhì)體和順鉑脂質(zhì)體已在國外上市。
2、抗寄生蟲藥物載體：苯硫咪唑脂質(zhì)體和阿苯達唑脂質(zhì)體等。利用脂質(zhì)體的被動靶向性，提高藥物的生物利用度，減少用量，降低毒副作用。
3、抗菌藥物載體：慶大霉素脂質(zhì)體和兩性霉素B，可減少藥物的耐藥性，降低心臟毒性。
4、激素類藥物載體?！ ?/p>
給藥途徑
脂質(zhì)體的給藥途徑主要包括(1)靜脈注射；(2)肌內(nèi)和皮下注射；(3)口服給藥；(4)眼部給藥；(5)肺部給藥；(6)經(jīng)皮給藥；(7)鼻腔給藥。
脂質(zhì)體的體內(nèi)過程
脂質(zhì)體與細胞之間作用的主要形式包括膜間轉(zhuǎn)運（細胞膜的脂質(zhì)交換）、接觸釋藥、吸附、融合和內(nèi)吞?！ ?/p>
脂質(zhì)體的發(fā)展趨勢及存在問題
1. 趨勢：高效、低毒和靶向。
2. 問題：穩(wěn)定性較差，防止?jié)B漏。
國外脂質(zhì)體的開發(fā)及上市情況
藥物 適應(yīng)癥 公司
制霉菌素 霉菌感染 Argus
紫杉醇脂質(zhì)體 非小細胞肺癌等 Science Biotechnology Inc.
表阿霉素 卡波濟肉瘤 Liposome Technology Inc.
兩性霉素B 霉菌感染 The Liposome Company(TLC)
鹽酸阿霉素 癌癥 The Liposome Company(TLC)
慶大霉素 細胞內(nèi)文原體 The Liposome Company(TLC)
兩性霉素B 霉菌感染 Nexstar
阿霉素 卡波濟肉瘤 Nexstar
柔紅霉素 癌癥 Nexstar
甲肝疫苗 免疫疫苗 Swiss Serum institute
新型靶向脂質(zhì)體
1、前體脂質(zhì)體：將脂質(zhì)吸附在極細的水溶性載體如氯化鈉、山梨醇等聚合糖類（增加脂質(zhì)分散面積）制成前體脂質(zhì)體，遇水時脂質(zhì)溶脹，載體溶解形成多層脂質(zhì)體，其中載體的大小
直接影響脂質(zhì)體的大小和均勻性。前體脂質(zhì)體可預(yù)防脂質(zhì)體之間相互聚集，且更適合包封脂溶性藥物。
2、長循環(huán)脂質(zhì)體: 經(jīng)過PEG修飾，以增加脂質(zhì)體的柔順性和親水性，通過單核-巨噬細胞系統(tǒng)吞噬，減少脂質(zhì)體脂膜與血漿蛋白的相互作用，延長循環(huán)時間，稱為長循環(huán)脂質(zhì)體
(long-circulating liposome)。長循環(huán)脂質(zhì)體有利于肝脾以外的組織或器官的靶向作用。同時，將抗體或配體結(jié)合在PEG的末端，既可保持長循環(huán)，
又可保持對靶體的識別。
3、免疫脂質(zhì)體：脂質(zhì)體表面聯(lián)接抗體，對靶細胞進行識別，提高脂質(zhì)體的靶向性。如在絲裂霉素（MMC）脂質(zhì)體上結(jié)合抗胃癌細胞表面抗原的單克隆抗體3G 制成免疫脂質(zhì)，在
體內(nèi)該免疫脂質(zhì)體對胃癌靶細胞的M85殺傷作用比游離MMC提高4倍。
4、熱敏脂質(zhì)體：利用在相變溫度時，脂質(zhì)體的類脂質(zhì)雙分子層膜從膠態(tài)過渡到液晶態(tài)，脂質(zhì)膜的通透性增加，藥物釋放速度增大的原理制成熱敏脂質(zhì)體。例如將二棕櫚酸磷脂
（DPPC）和二硬脂酸磷脂(DSPC)按一定比例混合，制成的3H甲氨喋呤熱敏脂質(zhì)體，再注入荷Lewis肺癌小鼠的尾靜脈后，再用微波加熱腫瘤部位至42℃，病灶部位
的放射性強度明顯的高于非熱敏脂質(zhì)體對照組。
5、pH敏感性脂質(zhì)體：由于腫瘤間質(zhì)的pH比周圍正常組織細胞低，選用對pH敏感性的類脂材料，如二棕櫚酸磷脂或十七烷酸磷脂為膜材制備成載藥脂質(zhì)體。當脂質(zhì)體進入腫瘤部
位時，由于pH的降低導(dǎo)致脂肪酸羧基脂質(zhì)化成六方晶相的非相層結(jié)構(gòu)，從而使膜融合，加速釋藥。
總之，脂質(zhì)體作為藥物載體是臨床應(yīng)用較早，發(fā)展最為成熟的一類新型靶向制劑。目前，美國FDA批準上市的脂質(zhì)體產(chǎn)品有兩性霉素B、阿霉素脂質(zhì)體。批準進入臨床試驗的脂
質(zhì)體有丁胺卡鈉霉素。未來脂質(zhì)體的研究主要集中在以下三個面:
1、膜結(jié)構(gòu)與載藥性質(zhì)之間的關(guān)系；
2、脂質(zhì)體在體內(nèi)的靶向特性；
3、在體外培養(yǎng)中將基因和其他物質(zhì)導(dǎo)入細胞內(nèi)有望成為基因藥物載體。
脂質(zhì)體是由脂雙分子層組成的顆粒，可介導(dǎo)基因穿過細胞膜。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)比利用病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)進行基因轉(zhuǎn)移具有以下明顯的優(yōu)勢:①脂質(zhì)體與基因的復(fù)合過程比較容易;②易于大量生產(chǎn);③脂質(zhì)體是非病毒性載體，與細胞膜融合將目的基因?qū)爰毎?，脂質(zhì)即被降解，無毒，無免疫原性;④DNA或RNA可得到保護，不被滅活或被核酸酶降解;⑤脂質(zhì)體攜帶的基因可能轉(zhuǎn)運至特定部位;⑥體外和體內(nèi)試驗都表明，接近染色體大小的DNA片段也能被轉(zhuǎn)運至宿主基因組中并增長;⑦轉(zhuǎn)染過程方便易行，重現(xiàn)性好。
脂質(zhì)體是具有雙層膜的封閉式粒子，自身聚集性脂類分子包封內(nèi)水相介質(zhì)，可分為大、小多層，寡多層和單室脂質(zhì)體，醫(yī)學(xué)應(yīng)用較多為小單室脂質(zhì)體?；谥|(zhì)體作為藥物載體系統(tǒng)的經(jīng)驗，理想的用于轉(zhuǎn)運基因的脂質(zhì)體，對于質(zhì)粒DNA具有高包封率，保護DNA不被血漿核酶降解的特點，它們粒徑分布范圍窄，粒徑平均為100 nm或者更小。為使脂質(zhì)體接近血管外區(qū)域，故采用具有廣泛的結(jié)合潛力脂類，這種特殊脂類可促進與細胞膜融合和/或提高脂質(zhì)體在循環(huán)系統(tǒng)中的穩(wěn)定性。第1種為傳統(tǒng)上的脂質(zhì)體，人們可控制其體外行為，但不能控制其體內(nèi)行為，它們很快被滅活或被固定;第2種為無活性脂質(zhì)體(即不與外界作用)，由于聚合物包封于表面的立體穩(wěn)定性而抑制其相互作用;第3種脂質(zhì)體表面結(jié)合抗原、凝集素或其他基團，由于表面結(jié)合的特定配基，也可特定地相互作用;第4種為反應(yīng)活性脂質(zhì)體，如離子型、靶敏感型和融合性脂質(zhì)體，這種脂質(zhì)體有時指相轉(zhuǎn)變的多孔脂質(zhì)體，脂質(zhì)體內(nèi)有離子敏感亞基，Ca2+ 其他金屬離子敏感性脂質(zhì)體，也包括陽離子脂質(zhì)體，陰離子脂質(zhì)體。陰離子脂質(zhì)體不屬于有反應(yīng)活性類，但特殊的試驗如試管內(nèi)與相反電荷(多)離子相互作用例子除外[1]。
常規(guī)脂質(zhì)體進入細胞轉(zhuǎn)運DNA實驗，其原理是脂質(zhì)體增強細胞體的聚集，即加速大分子、荷電多的分子透過膜，該過程相當復(fù)雜，尤其在包封較大片段時，在實踐中這種技術(shù)只在體外使用且要用融合劑，荷電越多用途越少。
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