血清
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血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。
目錄 |
血清類別
胎牛血清 、透析型胎牛血清 、天然低IGG胎牛血清 、干細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清 、特殊用途胎牛血清 、活性炭/葡萄糖處理胎牛血清 、胎牛血清替代物 、小牛血清 、新生牛血清 、加強(qiáng)型小牛血清 、補(bǔ)鐵小牛血清 、成牛血清 、供體馬血清 、兔血清 、雞血清 、豬血清 、馬血清 、其他動(dòng)物血清 、合成血清替代品?！ ?/p>
主要成分
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理條件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展，但仍存在一些問(wèn)題。主要是：
第一:血清的成份可能有幾百種之多，目前對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚，尤其是對(duì)其中一些多肽類生長(zhǎng)因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí)，這給研究工作帶來(lái)許多困難；
第二:血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制；
第三:不能排除血清中含有易變物質(zhì)，這被認(rèn)為是“瓶中惡化”的原因之一。
鑒別方法
血清
血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過(guò)程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無(wú)纖維蛋白原，這一點(diǎn)是與血漿最大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學(xué)成分的分析，都以血清為樣品?！ ?/p>
血漿
血漿是血液的液體成分，血細(xì)胞懸濁于其中。人體含有2750-3300毫升血漿，約占血液總體積的55%。血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運(yùn)載血細(xì)胞，同時(shí)也是運(yùn)輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。
將新鮮血液離心，使血細(xì)胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子?！ ?/p>
主要作用
●提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。
●提供激素和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。
●提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。
●提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。
●對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來(lái)終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x解毒中起重要作用，如SeO3,硒等
常見(jiàn)問(wèn)題
保存血清最好的方法？
血清應(yīng)保存在-5C至-2OC。然而，若存放于4C時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議將無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)?a href="/w/%E7%81%AD%E8%8F%8C" title="滅菌">滅菌容器內(nèi)，再放回冷凍。
如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？
將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻?！ ?/p>
如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
1、解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2、解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生
3、請(qǐng)勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。
5、若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56。C，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。但不建議以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。
何謂熱滅活?
一般是以56C，30分鐘來(lái)處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。
有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37C環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái)，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間，更確保您血清的質(zhì)量!另外，購(gòu)買已滅活成品也不失一個(gè)捷徑，請(qǐng)?jiān)谫?gòu)買的時(shí)候注意詢問(wèn)廠家是否是已滅活血清。
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