臨床生物化學(xué)/連續(xù)監(jiān)測(cè)法中的干擾因素及其控制
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大多數(shù)測(cè)定標(biāo)本不是純酶制劑，而是體液或組織液。其中除了測(cè)定酶外，還存在著其它酶和各種物質(zhì)，如使用酶偶聯(lián)反應(yīng)，在反應(yīng)體系中又外添了大量的各種酶制劑，因此在反應(yīng)體系中可能出現(xiàn)一些我們不希望的副反應(yīng)或旁路反應(yīng)，這些都有可能對(duì)測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)生干擾。
（一）其它酶和物質(zhì)的干擾
如組織勻漿中往往含有NADH-細(xì)胞色素C還原酶，它將干擾各種還原酶的測(cè)定。臨床酶測(cè)定中最典型的例子是血液中丙酮酸對(duì)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定的干擾，由于反應(yīng)體系中含有大量乳酸脫氫酶和NADH，可與丙酮酸反應(yīng)消耗NADH，引起340nm處吸亮度下降，假如將此NADH下降也算為ALT活性將引起誤差。其它如紅細(xì)胞中腺苷酸激酶（AK）對(duì)CK測(cè)定的干擾，在CK的酶偶聯(lián)體系中ADP是CK底物，但它又同時(shí)是AK的底物，二個(gè)酶反應(yīng)都產(chǎn)生ATP，在工具酶（已糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶）作用下都產(chǎn)生NADH引起340nm處吸光度上升，其結(jié)果是CK測(cè)定結(jié)果偏高，為避免此種干擾，所以在反應(yīng)體系中加入AK的抑制劑AMP和二腺苷酸5′磷酸。
（二）工具酶的污染
目前試劑中所用的試劑酶多從動(dòng)物組織或細(xì)菌中提取，不可避免地會(huì)污染有其它酶，如不注意此問(wèn)題，會(huì)引起不正確結(jié)果，例如丙酮酸羧化酶催化下列反應(yīng)：
可加入蘋(píng)果酸脫氫酶和NADH進(jìn)行測(cè)定，將草酰乙酸轉(zhuǎn)變?yōu)樘O(píng)果酸，并將NADH轉(zhuǎn)變?yōu)镹AP+。如果工具酶蘋(píng)果酸脫氫酶不純，含有乳酸脫氫酶，也可以作用底物之一的丙酮酸，同時(shí)消耗NADH，這樣就無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)定丙酮酸羧化酶活性。
更有甚者，有些工具酶中就混有測(cè)定酶，這種情況下，將產(chǎn)生很高的本底。
所以所用的工具酶必須很純，并檢查污染酶的含量，例如測(cè)定天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶所用的蘋(píng)果酸脫氫酶中所含雜的AST時(shí)，按IFCC規(guī)定不應(yīng)超過(guò)0.005％。
（三）非酶反應(yīng)
有些底物不穩(wěn)定，沒(méi)有酶的作用就能自行反應(yīng)，例如ALP的底物磷酸對(duì)硝基酚配成的底物溶液，室溫放置過(guò)夜，即自行水解釋放出對(duì)硝基成黃色。又如測(cè)醛縮酶時(shí)，其底物醛類(lèi)化合物可以和NAD+起非酶反應(yīng)產(chǎn)生一種具有類(lèi)似NADH吸收光譜的化合物，給測(cè)定帶來(lái)困難。
（四）分析容器的污染
如沖洗不當(dāng)，分析容器和管道中混雜有各種物質(zhì)，可能影響酶活性，如微量重金屬可使酶失活，殘留的表面活性劑可能抑制酶活性。
（五）沉淀形成
使用光學(xué)法監(jiān)測(cè)酶反應(yīng)時(shí)，如有沉淀形成或組織勻漿中顆粒的下沉都會(huì)引起吸光度變化，引起測(cè)定結(jié)果誤差，此情況常見(jiàn)于底物溶解度低而反應(yīng)體系中底物濃度偏高?？梢?jiàn)于用γ-谷氨酰對(duì)硝基苯胺為底物測(cè)GGT時(shí)。
對(duì)上述的一些問(wèn)題?？赏ㄟ^(guò)試劑空白管檢出并加以校正。不同廠家的ALT，AST試劑盒由于雜酶存在，試劑空白管可以測(cè)出多少不等轉(zhuǎn)氨酶活性，個(gè)別可達(dá)5U/L以上，這種試劑無(wú)法使用，較好的試劑盒也在2U/L左右。如不作試劑空白管對(duì)結(jié)果加以校正，所測(cè)結(jié)果將偏高，用半自動(dòng)分析儀測(cè)定酶時(shí)特別要注意作試劑空白管，有時(shí)還需作標(biāo)本對(duì)照管，例如測(cè)ALT時(shí)為除去GLD的干擾，可以在底物溶液中不加入丙氨酸，與標(biāo)本中GLD作用引起NADH下降。
解決這些問(wèn)題另一個(gè)有效措施就是不用單一試劑測(cè)酶活性，改用雙試劑，先加的第一試劑常不含底物或底物之一，但含有所有其它成分，與標(biāo)本作用一段時(shí)間待吸光度停止變化后，再加入底物開(kāi)始測(cè)定酶的反應(yīng)。
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