臨床生物化學(xué)/固定時(shí)間法（取樣法）

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臨床生物化學(xué)

血清酶定量的檢測技術(shù)
- 測定酶活性濃度的兩大類方法
  - 固定時(shí)間法（取樣法）
  - 連續(xù)監(jiān)測法與反應(yīng)進(jìn)程的分析
  - 連續(xù)監(jiān)測法測酶活性濃度
  - 酶活性的濃度單位
  - 連續(xù)監(jiān)測法中的干擾因素及其控制

前面已經(jīng)提到，早期臨床實(shí)驗(yàn)室測酶活性時(shí)常使用比色法，先讓酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時(shí)間，然后停止酶反應(yīng)，加入試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。由于比色法靈敏度較低，或由于手工操作不易控制好，常定在30分鐘左右。歷史上這類方法常被命名為“終點(diǎn)法”、“二點(diǎn)法”、“固定時(shí)間法”和“取樣法”。大多數(shù)文獻(xiàn)使用“固定時(shí)間法”。此命名指出了用這類方法測酶活性濃度，必須保證酶和底物在所選定的溫度下作用時(shí)間要很精確，否則將引起較大誤差。但“取樣法”的命名更具有特征性。因它指出此類方法和下面將提到的另一類連續(xù)監(jiān)測法相比較，最基本一點(diǎn)的是此類方法停止反應(yīng)后才測底物或物的變化。很難進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測，而另一類方法則不需停止酶反應(yīng)，就可測定反應(yīng)物的變化，很容易觀察到反應(yīng)的整個(gè)過程。后一類方法開始于50年代，Warburg首先用分光光度計(jì)。在340nm處直接監(jiān)測到反應(yīng)物NADH的動(dòng)態(tài)變化過程。由于不停止酶反應(yīng)，不需添加其它呈色試劑。測定方法簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，逐步取代了“取樣法”成為目前測酶活性的主要方法。

由于經(jīng)歷了一個(gè)發(fā)展過程，命名比較混亂而且大部分不甚確切，IFCC建議命名為“連續(xù)監(jiān)測法”，不用目前廣為流行的“動(dòng)態(tài)法”術(shù)語。其原因是目前測酶活性濃度方法都是基于化學(xué)反應(yīng)。圖17-6是一個(gè)典型的化學(xué)反應(yīng)過程。

動(dòng)態(tài)和平衡概念的示意圖

圖17-6　動(dòng)態(tài)和平衡概念的示意圖

可以看出整個(gè)反應(yīng)過程，可以大致分為二個(gè)時(shí)期。一開始為動(dòng)態(tài)期，化學(xué)反應(yīng)按一定速度進(jìn)行，反應(yīng)物濃度隨時(shí)間而變化，且變化程度不斷變小，到一定時(shí)間?；瘜W(xué)反應(yīng)或者達(dá)到平衡，或者反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)，此時(shí)反應(yīng)速度為零，反應(yīng)物濃度不變。最近IFCC文件按所用方法所測定的反應(yīng)是在達(dá)到平衡前還是平衡后。分別命名為動(dòng)態(tài)法或平衡法。一般文獻(xiàn)往往將后一類方法稱為終點(diǎn)法。