臨床生物化學(xué)/載脂蛋白測(cè)定

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臨床生物化學(xué)

血漿蛋白及其代謝紊亂
- 脂蛋白和脂質(zhì)測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)
  - 血漿脂蛋白測(cè)定
  - 血清總脂質(zhì)測(cè)定
  - 膽固醇測(cè)定
  - 甘油三酯測(cè)定
  - 磷脂測(cè)定
  - 游離脂肪酸測(cè)定
  - 載脂蛋白測(cè)定

血清載脂蛋白（Apo）包括ApoAⅠ、AⅡ、B₁₀₀、CⅡ、CⅢ、E和（a），已屬常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。血清中載脂蛋白均結(jié)合于脂蛋白中，測(cè)定時(shí)要加用解鏈劑，使脂蛋白中Apo暴露再進(jìn)行測(cè)定。

目前測(cè)定血清中Apo的含量的方法是利用相應(yīng)特異抗體試劑進(jìn)行測(cè)定?，F(xiàn)有羊抗人ApoAⅠ、AⅡ、B₁₀₀、CⅡ、CⅢ、E和(a)等抗體試劑。測(cè)定原理是將某一特異抗體加到待測(cè)人血清中，即與血清中相應(yīng)抗原形成抗原抗體復(fù)合物，根據(jù)復(fù)合物的量，即可測(cè)出血清中某一Apo含量。例如在人血清中加入抗人ApoAⅠ抗體，即與血清中ApoAⅠ（抗原）結(jié)合形成復(fù)合物，再定量即可測(cè)出血清中ApoAⅠ含量。

⒈免疫擴(kuò)散法先制備含Apo抗體的瓊脂糖凝膠，間隔等距離打孔，加入待測(cè)人血清，水平置于溫箱（37℃）保溫24或48h，抗原從孔中間向周圍擴(kuò)散，因凝膠板中有相應(yīng)抗體，經(jīng)一定時(shí)間擴(kuò)散后，最后在凝膠孔周圍形成一圓型沉淀圈，測(cè)量其圓直徑，以圓的面積大小計(jì)算血清中Apo含量。該法要求在測(cè)量圓周大小時(shí)，一定要精確到0.1mm。這一測(cè)定方法可適用于以抗體為試劑販所有微量蛋白的測(cè)定，但易受多種因素的影響，難以測(cè)準(zhǔn)，有淘汰的趨勢(shì)。

⒉免疫火箭電泳先制備含某一Apo抗體的瓊脂糖凝膠，靠近陰極端打孔，加入待測(cè)血清，進(jìn)行電泳。血清中Apo抗原往正極移動(dòng)，一定時(shí)間（約3h）后，即可形成類似火箭的沉淀峰，根據(jù)火箭峰高度或面積的大小計(jì)算血清中Apo含量。在嚴(yán)格掌握電泳條件下，本法是一種較為簡(jiǎn)便、試劑用量少的好方法。

⒊免疫比濁法免疫比濁法分為免疫透射比濁法和免疫散射比濁法。

Apo的特異抗體與血清中相應(yīng)的抗原結(jié)合形成抗原抗體免疫復(fù)合物，并形成微細(xì)顆粒，混懸于溶液介質(zhì)中，光線通過這種渾濁介質(zhì)溶液時(shí)被吸收一部分，吸收的多少與混濁顆粒的量成正比。在抗體量一定的條件下，抗原越多，抗原抗體復(fù)合物越多，溶液越渾濁，吸收光越多，以此對(duì)抗原進(jìn)行定量，這種通過測(cè)定光吸收量的方法稱為透射比濁法。該法是目前使用最為廣泛的方法，快速準(zhǔn)確，可在自動(dòng)生化分析儀上作批量檢測(cè)。

當(dāng)光線通過含抗原體復(fù)合物的渾濁介質(zhì)溶液的混懸顆粒時(shí)，出現(xiàn)光散射作用，散射光強(qiáng)度與溶液中混懸顆粒的量成正比，這種測(cè)定光散射強(qiáng)度的方法稱為免疫散射比濁法。該法的進(jìn)行，需要有具備測(cè)定散射光的儀器如散射比濁儀等。

免疫比濁時(shí)，由于抗原與抗體結(jié)合的過程中，吸收度與濃度之間不呈線性關(guān)系，一般是三次程曲線關(guān)系。若要將抗原與抗體兩個(gè)變量之間的變動(dòng)特征恰當(dāng)?shù)胤从吵鰜恚枰?jīng)過三次程擬合成近似直線化的曲線方程，再進(jìn)行運(yùn)算。免疫比濁的實(shí)際操作過程中，可采用終點(diǎn)法或速率法，用五點(diǎn)或七點(diǎn)不同濃度進(jìn)行定標(biāo)，經(jīng)三次曲線方程擬合求出一條能反映真實(shí)情況的濃度與吸光度的關(guān)系曲線方程，作為定量的工作曲線。如果以單一標(biāo)準(zhǔn)濃度定標(biāo)，以一次方程直線回歸運(yùn)算，所測(cè)結(jié)果僅在標(biāo)準(zhǔn)濃度上下波動(dòng)，真正的過低和過高值無法測(cè)準(zhǔn)。

免疫比濁法所用抗體應(yīng)是單價(jià)、特異并且高效價(jià)的，尤其是抗體若非單一而混有少量其他蛋白抗體，在血清中形成的復(fù)合物將是一種大雜燴，非單一蛋白的復(fù)合物，測(cè)出結(jié)果偏高而不準(zhǔn)確。