厭氧培養(yǎng)

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厭氧培養(yǎng) anaerobic culture 指把微生物置于與分子態(tài)氧隔絕狀態(tài)下所進(jìn)行的培養(yǎng)。專性厭氧細(xì)菌不這樣培養(yǎng)就不能生長(zhǎng)發(fā)育,但在實(shí)驗(yàn)條件下,有時(shí)也把兼性厭氧細(xì)菌也進(jìn)行這樣培養(yǎng)。由于目的不同而有種種培養(yǎng)方法,可分為以下幾大類:

(1)與空氣隔絕或盡量少接觸空氣的培養(yǎng)法:在三角瓶瓶頸以下裝滿液體培養(yǎng)基,通過煮沸把溶解的空氣趕出后,立即冷卻進(jìn)行細(xì)菌接種。由于發(fā)酵而產(chǎn)生H2和CO2時(shí),就可進(jìn)一步確認(rèn)是厭氧細(xì)菌。另外,把瓊脂培養(yǎng)基加入普通試管約10厘米高度進(jìn)行穿刺培養(yǎng),或移植于液體培養(yǎng)基和固體斜面培養(yǎng)基上以后,再加一層液體石臘或礦物油,用這些方法可防止與空氣接觸。(2)除掉空氣的方法:把微生物裝入耐壓容器中進(jìn)行真空培養(yǎng),或充滿二氧化碳、氫氣、氮?dú)狻鍤獾?。這些氣體可把事先混入的微量氧氣除掉。在氫存在時(shí),可用置換后飛濺火花等方法來除掉殘存的氧氣(3)去氧的方法:使用堿性鄰苯 三酚(pyrogallol) 、黃磷、金屬鉻和稀硫酸進(jìn)行化學(xué)除氧,或使用好氧細(xì)菌及發(fā)芽的種子,使通過呼吸而消耗掉氧氣。(4)在培養(yǎng)基中加入還原劑(如0.1%的巰基乙酸鈉鹽,0.01%的硫化鈉等)。以上各種方法進(jìn)行適當(dāng)組合就能進(jìn)一步確認(rèn)厭氧細(xì)菌。為了確定厭氧性,可在堿性條件下加入葡萄糖并加熱,與配制的還原型次甲藍(lán)美藍(lán))溶液一起加入,保持脫色狀態(tài)即可。

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